Vibrio cholerae cholerae 5 бактериален щам serovara ogawa - производител на серумни холерни антитела

Изобретението е предназначено за лабораторна диагностика на холера, както и за имунологични и генетични изследвания. Viberio cholerae cholerae 01KM 193 5 serovar Ogawa щам е продуцент на антитела. Използва се за получаване на аглутиниращ серум на холера Ogawa. Щамът има добре амплифицирани последователности на оперона на гена, който определя синтеза на А и В субединици на холера ентеротоксин. Щамът е силно антигенен. Когато конете и зайците се имунизират с корпускуларен О-антиген, той стимулира образуването на специфични антитела във високи титри. Изобретението ще увеличи активността и специфичността на холерния серум на Ogawa.

Изобретението се отнася до областта на микробиологията, по-специално до лабораторна диагностика на холера и до щамове-продуценти на диагностични серуми, може да се използва при имунологични, генетични изследвания и за получаване на холерен аглутиниращ серум от Ogawa.

При получаване на холерен серум Ogawa, съгласно производствените разпоредби N 144-97, щамовете V. cholerae O-1 от групата Ogawa serovar се използват за имунизация на животни. Щамовете Vibrio cholerae трябва да имат морфологични, културни, биохимични и серологични свойства, типични за S-формата.

Холерните щамове от групата O-1, използвани като антигени за имунизация, трябва да бъдат избрани измежду най-аглутиновите щамове. Културите от тези щамове трябва да бъдат аглутинирани до титър с хомологични национални стандартни проби (RSD).

Известен щам серовар Ogawa, използван за получаване на заешки холерен серум Ogawa. Използван корпускуларен О-антиген, приготвен от щама Ogawa serovar Vibrio cholerae cholerae 41. Щамът преди е бил използван като антиген за имунизация на животни - производители на серум Ogawa, характеризиран като имуногенен. Недостатъци: когато животните се имунизират с антигена на този щам, се получава достатъчно висок процент на неспецифични антитела, което изисква 6-8 адсорбции (Доклад от изследването (в заключение): Irkut. NIPCHI. Head. Tyumentsev SN, Inv. N 0280063297, Иркутск, 1983).

Целта на изобретението е бактериален щам Vibrio cholerae cholerae 5 serovar Ogawa, позволяващ да се увеличи активността и специфичността на холерния серум Ogawa.

Същността на изобретението е използването на щама Vibrio cholerae cholerae 5 serovar Ogawa като продуцент на антитела за производството на холерен серум Ogawa.

Vibrio cholerae cholerae 5 щам серовар Ogawa, специално наименование - "форма 30", опис N4, родословие на щама - е получен от фаговия отдел на TsGNKI през 1949 г. Депонирахме го в Държавната колекция от бактериални патогени от 1-2 групи патогенност в Руския изследователски противочумнен институт "Микроб" под № 01 KM 193. Щамът се характеризира със следните културно-морфологични и физико-биологични характеристики.

Културни и морфологични характеристики. Върху агар на Мартин или казеин-дрожден агар (рН 7,6) той образува изпъкнали колонии с правилна заоблена форма с гладки ръбове и гладка повърхност. Колониите при падаща светлина са синкави с диаметър до 2 mm; в Мартинов бульон или 1% пептонова вода (рН 7,6) при 37 o C след 24 часа - устойчива еднородна мътност, на повърхността - деликатен синкав филм. Когато се оцветяват по Грам - грам-отрицателни тънки пръчки с лека кривина, понякога се откриват къси вериги. Спорите и капсулите не се образуват.

Vibrio cholerae cholerae 5 щам расте върху хранителни среди, приготвени от хидролизати (месо, казеин, мая). Оптималната стойност на pH е 7,6-8,2. Оптималната температура за отглеждане на микроб е 37 o C. Аеробна. Щамът ферментира глюкоза, левулоза, галактоза, захароза, манитол, малтоза с образуването на киселина, не ферментира лактоза, арабиноза, дулцит, сорбитол. Млякото подсирява, не образува сероводород, отделя индол, втечнява желатина. Тестът за хемолиза е отрицателен. Тестът с холерен бактериофаг С-4 върху твърда среда е положителен. Не се лизира от елторни фаги.

Генетични характеристики: щамът Vibrio cholerae cholerae 5 има добре амплифицирани последователности на генния оперон, който определя синтеза на А и В субединици на холера ентеротоксин. Резултатът от полимеразната верижна реакция (PCR) дава възможност да се идентифицира щамът като потенциално холерогенен. Нивото на флуоресценция на амплифицирания фрагмент след оцветяване на гела с етидиев бромид е най-високото в щама Vibrio cholerae cholerae 5.

В обемната реакция на аглутинация (RA) OSS аглутинира, както следва: холерен аглутиниращ O-серум до титър (1: 3200), холера Ogawa - до титър (1: 1600), холерен аглутиниращ Inaba и RO - не аглутинатен. Щамът Vibrio cholerae cholerae 5 е силно антигенен, с интравенозна имунизация на коне и зайци с корпускуларен О-антиген стимулира образуването на специфични антитела в титри 1: 6400 120 - 1: 4800615, неспецифични антитела в титри 1: 1600 120 - 1: 2200 320.

Пример 1. За получаване на заешка холера, аглутинираща Ogawa, заешкият серум се имунизира интравенозно с корпускуларен О-антиген с интервал между инжекциите в продължение на три дни в дози 5, 9, 13 милиарда в 1 ml физически. решение. На 7-ия ден след последното инжектиране на антиген е извършена тотална флеботомия. Полученият серум беше проверен в RA за наличие на специфични и неспецифични антитела. Установено е, че имунизацията на зайци с антигена на гореспоменатия щам причинява образуването на специфични антитела в кръвния серум в титър 1: 4800615, неспецифичен - 1: 1600120, т.е. видима е разликата в титрите на специфични и неспецифични антитела, което изисква само 2-3 адсорбция.

Пример 2. За да се получи серумен конски холера, производителите се имунизират интравенозно с корпускуларен О-антиген в два цикъла с интервал между инжекции от два дни в дози съгласно разпоредбите (Наредби за производство N 144-97). На седмия ден след последната инжекция на конете се взема проба от 6 литра кръв през първия ден; през ден се извършва повторно кръвопускане в същия обем като първия. Комбиниран е серумът от двете флеботомии. В получения серум се проверява наличието на специфични и неспецифични антитела в обемния RA, който е съответно 1: 6400120 и 1: 2200320, т.е. разликата в титрите на специфични и неспецифични антитела е видима, това изисква, както при заешки серуми, две или три адсорбции.

По този начин се препоръчва щамът Vibrio cholerae cholerae 5 да се използва като продуцент за производството на антитела от заешки холерен серум Ogawa в промишленото производство.

Бактериален щам Vibrio cholerae cholerae 01 KM 193 5 serovar Ogawa - производител на антитела срещу холерна серумна холера.