Ролята на гъбичната инфекция в човешката патология. Имунологични и молекулярни диагностични методи

Имунологични и молекулярни методи

Имунологични и молекулярни методи: в днешно време са станали много важни, особено със съмнение за атипични форми на заболявания, дълбоки, дисеминирани микози. Тези методи не са свързани с изолирането на патогена, като правило се записва нито степента на имунния отговор (определяне на специфични антитела и антигени), както и ДНК праймерите на съответния патоген.

Трябва да се отбележи, че основният "материал" за имунологична диагностика е кръвта, поради относителната трудност на изолирането на патогена директно от него и от дълбоките огнища на лезии, използвайки съществуващи преди това методи.

Значение имунологична диагностика се състои в определяне на вида и титъра на специфичните антитела в кръвта (по-рядко - в други биологични течности) - серологична версия на изследването, при която по-често се регистрират lgG-преципитини, което може да отразява факта на носене на микоза (за например кандидоза), както и предишна инфекция.

Горното е съществен недостатък на серодиагностиката поради липсата на антиген (например при C. albicans), който би се изразил независимо от фазата и растежа на гъбичките, околната среда и показва инфекция, включително в активна фаза (JP Martinez et al., 1998).

Препоръчително е да се определи нивото на различни класове антитела при създаване на редица техники (RSK, реакция на утаяване, имунодифузионна реакция на Манчини, имуноелектрофореза, ензимен имуноанализ и др.). Тестът за радиоалергосорбент (RAST), който регистрира IgE, може да има определена стойност при диагностицирането на свързани с алергията микози (включително кандидоза); може да бъде полезен при хронични инфекции на кожата и лигавиците, увреждане на белите дробове и др.

От друга страна, серологичните диагностични методи са склонни да се развиват и усъвършенстват; по този начин се разработват и тестват реакции, при които се използват имунодоминантни протеини на топлинен шок (hsp47), антигени на зародишни тръби, протеинази, енолази, манопротеини и др. (J. P. Garsia-Ruis et al., 1997).

Алтернатива на серологичните методи за изследване е регистрирането на гъбични антигени в кръвта; най-често срещаните комплекти са разработени и тествани за много патогени - гъби от рода Candida, аспергили, криптококи, диморфни гъби.

Най-разпространеният метод е латексната аглутинация, която регистрира различни антигени, например термостабилен манан или протеинови антигени в C. albicans. Поради променливата чувствителност се препоръчва повторно тестване. Ензимният имуноанализ и радиоимуноанализът са по-модерни и чувствителни, но са по-скъпи и трудни за изпълнение.

Молекулярни методи за идентифициране на патогенни гъби

Молекулярни методи за идентифициране на патогенни гъби: най-често срещаните от тях са полимеразна верижна реакция (PCR) и (по-рядко) - газово-течна хроматография; тествана е и лигазна верижна реакция (LCR).
Понастоящем PCR е най-тестваният за кандидоза с различна локализация; кръвта се взема като материал за изследване; възможно използване на урина, слюнка.

Газово-течната хроматография всъщност регистрира някои компоненти на клетъчната стена на гъбичките (например кандида), като определя т.нар. правомерни изомери на маноза и арабинитол; кръвта служи като материал за изследване. Един вид противопоказание за формулирането на метода е хронична бъбречна недостатъчност и други състояния, придружени от забавяне на тези метаболити и тяхното недостатъчно елиминиране; изчисляването на тяхната концентрация се основава на съдържанието на креатинин.

По този начин микологичното изследване включва микроскопия на патологичен материал, изолиране на патогена в културата - с изследване на естеството на растеж върху хранителни среди, биохимични свойства (например при идентифициране на дрождоподобната гъба Candida albicans - вида на филаментацията, хламидия, особености на ферментация). Идентифицирането на гъбичките (и нейните елементи) в тъканта остава един от основните и достъпни методи за диагностика на микозите (особено дълбоките).

Наред с класическите микологични изследвания се използват съвременни серологични и имунологични методи (CSC, имунодифузия, имуноелектрофореза, ензимен имуноанализ), хромография и др. (За съжаление някои от методите остават недостъпни в ежедневната практика на лекар).

Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.