Работа № 3. Определяне на активността на амилаза (диастаза) в кръвен серум и урина по метода на кима

ОБОСНОВКА ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА РАБОТАТА. Определянето на активността на амилазата в урината и кръвния серум се използва за диагностициране на заболявания на панкреаса.

Метод принцип. Методът се основава на колориметрично определяне на концентрацията на нишестения субстрат преди и след неговата ензимна хидролиза. 0,01 N се използва като работен разтвор. йоден разтвор.

Дължина на вълната 630-690 nm (червен филтър), кювета с дебелина на слоя 1 cm.

В 2 епруветки (експериментална и контролна) анализът се извършва съгласно таблицата:

Разтвор на устойчив нишестен субстрат

загрейте за 5 минути във воден термостат при 37С

Нехемолизиран кръвен серум

загрейте за 5 минути във воден термостат при 37С

Нехемолизиран кръвен серум

и разтворите са фотометрични спрямо водата

ИЗЧИСЛЕНИЯ. Изчисляването на активността на α-амилазата в g разцепено нишесте на 1 литър серум за 1 час инкубация при 37 ° C се извършва по формулата:

X = 240

Ek е изчезването на контролната проба;

Eop - изчезване на пробна проба.

Активността на α-амилазата в кръвния серум е нормална = 16-30 g/hl, в урината - 28-160 g/hl.

Повишаване на ензимната активност се наблюдава при паротит, панкреатит, рак на панкреаса, перитонит, чернодробна цироза, остър инфекциозен хепатит, извънматочна бременност, диабетна кетоацидоза.

Намаляване на активността на α-амилазата се отбелязва с атрофия на панкреаса, нарушена филтрационна функция на бъбреците, кахексия.

Урок номер 6 работа номер 1. Кинетика на действието на липазата. Ефект на жлъчката върху липазната активност

ОБОСНОВКА ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА РАБОТАТА. Панкреатичните липолитични ензими хидролизират хранителните мазнини в тънките черва. Жлъчните киселини емулгират мазнините, активират липазата и участват в усвояването на продуктите от храносмилането на липидите. Изследвайки кинетиката на липазното действие, е възможно да се проследи динамиката на ензимната активност и да се идентифицират факторите, влияещи на този процес (температура, концентрация на субстрата и продуктите на реакцията, жлъчка).

ПРИНЦИП НА МЕТОДА. Липазата катализира реакцията:

Триглицерид  глицерин + мастни киселини

ОТНОСНО

СН2 - О - С

R1CH2 - OH R1 - COOH

Относно липазата│

СН - О - ССН - ОН + R2– COOH

R2NON │

О СН2– ОН R3– COOH

СН2 - О - С

Скоростта на действие на липазата може да се определи от количеството мастни киселини, образувани за определен период от време. Количеството мастни киселини се определя чрез титруване с алкал с индикатор фенолфталеин и се изразява в ml 0,01 N алкален разтвор.

РАБОТЕН ПРОЦЕС: вземете две големи епруветки: експеримент 1 и експеримент 2.