Визуален метод

Мътността на CO образец, равна на 10 IU, приблизително съответства на следните концентрации на други микробни клетки в 1 ml (коефициент):

11 ∙ 10 9 клетки/ml за коклюшна бактерия;

0,93 ∙ 10 9 клетки/ml за бактерии от чревната група;

1,7 ∙ 10 9 клетки/ml за бактерии от бруцелоза;

2,2 ∙ 10 9 клетки/ml за Vibrio cholerae;

5,0 ∙ 10 9 клетки/ml за туларемични бактерии (francisellus).

За проба от СО 5 IU концентрацията на микробни клетки е 2 пъти по-малка от тази за СО 10 IU.

За проба от СО 20 IU концентрацията на микробни клетки е 2 пъти по-висока от тази за СО 10 IU.

Ако тестваният микроорганизъм не е посочен в текста по-горе, е позволено да се използва стойността на концентрацията за микроба, най-близък по размер до тествания.

Определяне на общата концентрация (ТК) на микробните клетки, използвайки CO мътност. Първоначалната суспензия на микроорганизмите се разрежда със стерилен 0,9% разтвор на натриев хлорид, докато мътността му е равна на мътността на стандартната проба, която се определя в съответствие с инструкциите за използване на мътността на CO с помощта на специална сравнителна таблица.

Изследваната микробна суспензия се смесва чрез разклащане или пипетиране в стерилен контейнер до хомогенност и се прехвърля в епруветка, снабдена с мътност CO, в обем 6-7 ml, което съответства на обема течност в CO епруветка. За да тествате с CO, работете само с тръби, снабдени с CO мътност.

Преди да започне измерването, стандартната проба се разклаща за 10-15 секунди, докато утайката изчезне напълно. Ако след разклащане остатък, видим за окото, остане в епруветката с мътност на СО, образецът се отстранява от циркулацията.

Комбинирайте епруветките с мътност CO и изследваната суспензия на микроорганизми в изправено положение на нивото на очите, плътно приложете епруветките към таблицата за сравнение и осветете с разпръснат източник на светлина, така че тръбите да не се предпазват една от друга от източника на светлина. Източникът на светлина може да бъде: флуоресцентна лампа с мощност от 20 до 40 W, лампа с нажежаема жичка с матов или матов филтър (сянка) с мощност от 40 до 60 W, разсеяна дневна светлина. Тестовете на пряка слънчева светлина не са разрешени. В случай на еднаква яснота на разглежданите елементи от сравнителната таблица през епруветка с CO и епруветка с изследвана микробна суспензия, тяхната мътност се счита за еднаква и равна на мътността, посочена на етикета на CO.

Грешката при визуално определяне на мътността, използвайки мътност CO е около 10%.

Не е позволено да се оставят проби с мътност RM под действието на бактерициден облъчвател, както и замразяване.

Изчисляването на OK на микробни клетки се извършва по формулата:

’

Където: V0 - обемът на първоначалната суспензия, ml;

Vi е обемът на стерилен 0,9% разтвор на натриев хлорид, използван за разреждане на първоначалната суспензия, ml;

к - коефициент: концентрация на изследваните микробни клетки в ml, съответстваща на 10 IU, CFU/ml.

Пример за определяне на общата концентрация (TC) на микробни клетки в жива суха ваксина с туларемия

Определянето се извършва с най-малко три проби.

Стерилен 0,9% разтвор на натриев хлорид се добавя на порции към 0,5 ml от ресуспендираната ваксина (V0 = 0,5 ml), за да доведе тестовата суспензия до мътност, съответстваща на 10 IU (Vi = 1,0 + 0,2 + 0,3 = 1,5 ml). Концентрацията на туларемични бактерии в суспензия (коефициент k), съответстваща на 10 IU, е 5,0 ∙ 10 9 CFU/ml.

Крайната стойност на общата концентрация на микробни клетки се изчислява като средната аритметична стойност на OK стойностите за три проби.

Стандарт за мътност на Макфарланд

Друг пример за стандартизация на мътността на микробната суспензия е използването на стандарта McFarland (McF). Съгласно инструкциите за употреба се приготвят 1% разтвори на бариев хлорид и сярна киселина. За да се подготви стандартът за мътност и суспензия на микроорганизмите, които трябва да бъдат изследвани, се избират епруветки със същия диаметър. 1% разтвор на сярна киселина се излива в епруветки от произведения стандарт в обема, посочен в таблицата. 1 и се добавя 1% разтвор на бариев хлорид, за да се получи общ обем от 10 ml. Тръбите с подготвения стандарт са херметически затворени. Течността в стандарта McFarland и епруветката трябва да бъде хомогенно мътна.

Внимание! Бариев хлорид и сярна киселина - токсични вещества.

Количествените характеристики на изследваната микробна суспензия се определят чрез сравнение с епруветките с най-близката мътност по същия начин, както при използване на CO мътност, като се вземат предвид данните, дадени в таблица. 1. Техниката не е предназначена за определяне на общата концентрация на микробни клетки в бактериални суспензии при производството и контрола на имунобиологични лекарства (ILP).

Таблица 1 - Количествена оценка на бактериални суспензии по скалата на McFarland