Устройства, методи и среди за отглеждане на анаероби

Ексикатор- стъклен лабораторен съд с вграден капак. В долната му част има допълнителен съд, където се излива смес от пирогалол и сода каустик или натриев хидросулфит и сода бикарбонат. Реколтата се поставя върху решетка и капакът се втрива с вазелин. Ексикаторът се поставя в термостат.

Метод на Фортнър. Хранителният агар се изсипва в чаша на Петри с
1-2% глюкоза. В средата на съда със стерилен скалпел се изрязва бразда с ширина приблизително 1 см. Едната половина от съда се инокулира с култура от аероби (сарцин, Е. coli), а втората - с култура от анаероби или материал, който да бъде изследван за тяхното присъствие. Посевената чаша се затваря, запечатва и поставя с терморегулатора с главата надолу. Бързо растящите аероби, абсорбиращи кислород, създават по този начин благоприятни условия за растежа на анаеробни микроорганизми.

Метод на Перец. Стъклените пръчки се поставят в стерилна чаша на Петри, върху която се поставят стъклени чинии или стъклени пързалки. В епруветка с 20 ml разтопен и охладен до 50 0 C MPA с 10% глюкоза (рН 7,0-7,2), добавете тестовия материал и добавете 2-4 капки 10% натриев хидросулфит в 10% разтвор на въглена киселина . Съдържанието на епруветката бързо се смесва и се изсипва в съда, така че агарът да запълни пространството между стъклената плоча и дъното на съда. Плаките се инкубират при 37 ° С за 24-48 часа. Колониите от анаероби растат под стъклена плоча.

Метод Veillon-Vignal. Тестовият материал се въвежда в епруветка с 0,5% разтопен и охладен до 40-45 ° C захарен агар и се смесва. Ако е необходимо, материалът се разрежда чрез прехвърляне в следващите 2-3 епруветки с разтопен агар. Съдържанието на тубите се събира в пипери на Пастьор. След пълнене на пипетата удълженият край се запечатва, а противоположният край се затваря със стерилен памучен тампон и се пълни с парафин. Тръбите се поставят в термостат; след 2-3 дни в агара растат дълбоки колонии, видими в пропусната светлина, които могат да бъдат изолирани. За целта епруветката се изрязва с пила над нивото на предвидената колония, напуква се и колонията се отстранява с примка и се култивира, за да се натрупа чиста култура в подходяща хранителна среда.

Метод на Битнер. Торба с филтърна хартия, съдържаща пирогалол, K2CO3 и талк, е прикрепена към капака на чаша на Петри с инокулация на изследвания материал или изолираната култура на анаероби. Чашата е запечатана с парафин или лента. Съдържанието на торбичката се овлажнява от конденза, който се образува, и съставките реагират, което е придружено от абсорбцията на O2 и отделянето на CO2.

Газов пакет (Generbag anaer). Анаерната система Generbag се състои от херметически затворени торбички, изработени от прозрачна пластмаса и генератори, съдържащи смес от вещества, които отстраняват кислорода. Последователност на работа: извадете генератора от торбата, поставете го в дъното на херметичната торбичка, след това поставете чашките (или епруветките) с инокулации и използвайте специална кламер, за да затворите торбата. Инкубация при 37 0 С.

Сряда Кита-Тароци. Съдържа месо-пептонов бульон, 0,5% глюкоза и 0,15% агар. На дъното на епруветка за адсорбция на O2 се поставят парчета варен черен дроб или кайма със слой от 1-1,5 cm и се изсипват 6-7 ml среда. Преди сеитбата средата се регенерира (загрява се за 15-20 минути на водна баня за отстраняване на въздуха и след това бързо се охлажда). След засяването средата се излива с вазелиново масло и се поставя в термостат.

Полутечен захарен агар (висок бар). В епруветка с
6-7 ml полутвърд хранителен агар, съдържащ 0,5-1% глюкоза, разтопен и охладен до 40-45 ° C, добавете тестовия материал и разбъркайте. Реколтата се поставя в термостат.

Среда за контрол на стерилността (SCS). Растежът на много анаеробни микроорганизми е възможен само в среди с нисък редокс потенциал. Следователно към средата се добавят редуциращи агенти, например тиогликолова киселина или нейната натриева сол, цистеин, аскорбинова киселина. Други компоненти на средата също изпълняват функциите на редуциращи агенти: глюкоза, пептон. SCS съдържа хранителен бульон, EKD витаминен препарат, NaCl, Na2CO3, глюкоза, натриев тиогликолат, цистеин, агар (0,75%). Средата се излива в 6-7 ml епруветки.

тестови въпроси