Тест на NASBA

Тест NASBA (усилване на базата на последователност на нуклеинова киселина) Съвременна техника за диагностика и наблюдение на терапия при различни полово предавани болести (съкратено ППБ) и някои други вирусни заболявания.

Методът се основава на амплифицирането на молекулите на рибонуклеинова киселина (РНК) на патогени, с участието на ензими на обратна транскриптаза, РНК полимераза и РНКаза, за разлика от PCR диагностиката (Полимеразна верижна реакция), по време на която се открива ДНК. Тестът на NASBA е разработен от J. Compton през 1991 г. Веднага след изобретяването на NASBA, последният се използва за бързо диагностициране и количествено определяне на HIV инфекцията в серума на пациента.

Характеристики и предимства

С теста NASBA могат да бъдат открити само живи клетки, в които рибонуклеиновата киселина се синтезира по време на живота им. За разлика от РНК, молекулата на дезоксирибонуклеиновата киселина (ДНК) е доста стабилна и не се разгражда след смъртта на микроорганизмите, поради което анализът (PCR диагностика) може да има положителен резултат поради съществуването на мъртви клетки на агента и дори унищожените им елементи. И РНК се различава от ДНК по това, че е много нестабилна; след смъртта на патогена тя се унищожава доста бързо и следователно нейното определяне става невъзможно. Това е от особено значение след терапията или когато се съмнявате. Например, ако PCR диагностиката се извършва не по-рано от три до четири седмици след края на лечението, тогава тестът на NASBA се взема пет до седем дни по-късно. Въпреки че молекулите на РНК могат да бъдат усилени и чрез PCR диагностика, използвайки обратна транскриптаза (за да се синтезира комплементарната ДНК верига като матрица), основното предимство на теста NASBA е, че той се извършва при изотермични условия - обикновено при постоянна температура от 41 ° С.

Тестът на NASBA има отличителна черта - много висока чувствителност. Само в една верига дезоксирибонуклеинова киселина се синтезират голям брой РНК молекули, които впоследствие участват в биосинтеза на протеини в клетките. В тази връзка броят на молекулите на РНК е в пъти по-голям от количеството на ДНК, което значително улеснява тяхното откриване. Това дава възможност да се диагностицира заболяването в най-началните етапи, както и в случай на мудни хронични реакции, когато няма изразени клинични симптоми. Откриването в реално време на продукти за усилване (NASBA-в реално време) с помощта на флуоресцентни сонди допълнително увеличава специфичността на метода и обективния характер на резултатите от диагностиката.

Изследователски обекти

Материалът за теста на NASBA може да бъде както следва:

  • остъргване на клетки от цервикалния канал;
  • остъргване на уретрални клетки;
  • сперматозоиди;
  • урина;
  • кръв.

Прилагане на теста NASBA

Тестът NASBA се използва широко за диагностициране и наблюдение на лечението и неговата ефективност при следните генитални инфекции:

В допълнение, тестът NASBA се използва за бързо диагностициране на определени патогенни вируси с едноверижна РНК молекула, например:

  • вирус на грип А (H1N1);
  • вирус на шап;
  • атипичен пневмония вирус (ТОРС);
  • човешки бокавирус (HBoV).

Също така техниката на NASBA е намерила своето приложение при диагностицирането на причинителя на африканската трипанозомоза (сънна болест) - Trypanosoma brucei.