Подготовка на кръвни серуми за серологични изследвания

Когато изследвате кръвни серуми на животни, трябва да се има предвид, че те могат да съдържат:

1) аглутинини към еритроцитите на животни от различни видове. Съдържанието им при различните животни е различно. Те се отстраняват от изследваните серуми. За това серумът е предварително обработен с еритроцити на животни от вида, които ще бъдат използвани в реакцията. По този начин, при изследване на серуми за наличие на антитела към вируса PG-3 на говеда в RTGA се използват еритроцити на морски свинчета, серумите се обработват предварително с еритроцити на морски свинчета (2-3 капки еритроцитна утайка на 5 ml от серум, разклаща се при 4 ° С в продължение на 20 минути и се центрофугира, супернатантният серум се използва в реакцията). За арбовирусни инфекции в RTGA се използват гъши еритроцити, серумите се обработват предварително с гъши еритроцити;

2) неспецифични вирусни инхибитори. Подобно на антителата, те са хуморален неспецифичен имунитетен фактор и неутрализират инфекциозната и хемаглутинираща активност на вирусите. Неспецифичните инхибитори показват своя ефект върху вирусите не само в тялото (in vivo), но и in vitro (in vitro). Наличието на тези инхибитори в тествания серум ще доведе до изкривяване на резултатите от серологичните реакции. Следователно всички тествани серуми се освобождават предварително от неспецифични инхибитори по различни методи преди реакцията. Инхибиторите могат да бъдат разделени на две групи:

а) термолабилни (β-инхибитори), които се отстраняват чрез нагряване на серумите в продължение на 30 минути при температура 56–63 ° C (в зависимост от вида на животното, от което е получен серумът). Преди нагряване серумът се разрежда поне 2 пъти с физиологичен разтвор, за да се избегне коагулация;

б) термостабилни (α-, γ-инхибитори). Някои от тях могат да издържат на нагряване до 75 ° С, други - до 100 ° С. Методите за отърваване от тях са различни и зависят от вида животно, от което е получен серумът, и от използвания в реакцията вирус. Следните методи са най-широко използвани в диагностичните лаборатории:

отстраняване на инхибитори с въглероден диоксид (CO2). За тази цел по-често се използва апарат Kipp. Въглеродният диоксид се пропуска за 5-7 минути през тестовия серум, разреден 1:10 с дестилирана вода, след това се центрофугира за 10 минути при 1500 min -1 (rpm) и след това 0,1 ml от супернатанта се добавя към 0,9 ml от течността на супернатантата, 5% разтвор на NaCl, загряван за 30 минути при 56 ° С и използвайте серума в реакцията;

отстраняване на инхибиторите чрез калиев перйодат (KIO4). За тази цел 1 част от 1% KIO4 се добавя към 1 част серум, държа се 2 часа при стайна температура, след това се добавят 2 обема 5% разтвор на глюкоза и 2 обема физиологичен разтвор (серумно разреждане 1: 10);

отстраняване на инхибитори с каолин. За целта 1 част от 25% суспензия на каолин във физиологичен разтвор се добавя към 1 част серум, получената смес се разклаща, оставя се за 20 минути при стайна температура, след което се центрофугира (10 минути при 2000 минути -1). В реакцията се използва супернатантната течност (серумно разреждане 1: 2);

има и други методи (преработка на суроватка с различни ензими);

3) при определяне на CSCs е необходимо да се вземе предвид, че серумите могат да имат антидопълнителна активност, т.е. способността да свързват или унищожават комплемента и следователно да предотвратяват хемолизата на еритроцитите в индикаторната система. Антидопълването може да бъде причинено от: индивидуални характеристики на животното; наличието на антикоагуланти, консерванти, бактерии в серума, както и дългосрочно съхранение на серуми. Има няколко метода за премахване на антидопълняването, но най-често използваният метод за лечение на серуми с комплемент от морски свинчета. 1 част от комплемента се добавя към 3 части серум, оставя се при 4 ° C за една нощ, след това серумът се загрява в продължение на 30 минути при 37 ° C, серумът се разрежда с физиологичен разтвор 1: 8 и се загрява за 30 минути при 60 ° ° С.