Хормонална диагностика на бременността

Методите за хормонална диагностика на бременността се основават на откриването на хорион гонадотропин (HCG) в урината на жена, за която се подозира, че е бременна. За тази цел са предложени различни тестови обекти: мишки, плъхове, зайци, жаби.

Според тежестта на промените, които настъпват в яйчниците на животните под въздействието на инжектираната CG, се различават 3 вида реакции: 1-ва реакция се характеризира с наличие на узряващи фоликули с натрупване на гранулозни клетки около яйцеклетката. С 2-ра реакция във фоликулите се образуват кръвоизливи (кръвни точки). Третата реакция се характеризира с образуването на жълти тела в яйчниците. Първата реакция не е специфична за бременността, тъй като е положителна при наличие на повишено количество фоликулостимулиращ хормон на хипофизната жлеза, когато функцията на яйчниците е депресирана или напълно изключена, като например в менопаузата. Ако има бременност, 2-ра и 3-та реакция трябва да са положителни.

Най-често срещаните са Реакция на Ашхайм - Цондек върху незрели женски мишки, върху възрастни женски мишки, реакция на Фридман при възрастни зайци и реакция на сперматозоиди Гали-Майнини върху мъжки жаби или жаби.

Реакция на Ашхайм - Цондек

Същността на реакцията се крие във факта, че урината на бременна жена, инжектирана под кожата на незрели женски бели мишки, причинява промени в репродуктивния апарат в тях, съответстващи на 2-ра и 3-та реакции. Урината на небременна жена не причинява такива промени или, в краен случай, може да се появи само 1-ва реакция.

След 96-100 часа животните се убиват с етер или се обезглавяват и коремната кухина се отваря. При положителна реакция промените в яйчниците могат лесно да бъдат открити с просто око или с лупа. В неясни случаи се препоръчва да се изрежат яйчниците, да се изплакнат с вода и да се поставят върху предметно стъкло в капка глицерин. След 10-15 минути яйчниците стават бледи и на този фон кръвните точки се появяват особено ярко. Според К. М. Фигурнов (1935) в 10% от случаите, за да се реши проблемът, трябва да се прибегне до микроскопско изследване. Реакцията на Ашхайм-Цондек дава верния отговор в 98%. След отстраняване на яйцеклетката от тялото, реакцията може да бъде положителна за още 8-10 дни.

Диагностика на бременността при възрастни мишки (реакция на Ескин и Фрейдович)

Реакция на Фридман

Полово зрелите зайци се използват като биологичен тест за диагностика на бременност. Те нямат спонтанно избухване на зрели фоликули и образуване на жълти тела. Тези процеси протичат само след като заекът е покрит от мъжки в резултат на рефлекторно възбуждане на предната хипофизна жлеза и освобождаване на гонадотропни хормони. След хипофизектомия, извършена в първите часове след чифтосването, фоликулите не се пукат. Въвеждането на 24 ml урина на бременна жена във ушната вена на заек за 2 дни (4 ml 6 пъти) води след 48 часа до кръвоизливи във фоликулите и началото на образуването на жълто тяло.

Същият заек може да се използва в експеримента 5–6 пъти (в случай на отрицателна реакция следващият експеримент се провежда след 1,5–2 седмици, с положителна реакция - не по-рано от 1 месец). Реакцията на Фридман дава верния отговор в 98-99% от случаите.

Диагностика на бременността при мъжки жаби

Биологичният тест за бременност, който се провежда върху мъжки жаби, стана широко разпространен. Гонадотропните хормони на хипофизната жлеза засягат половите жлези на индивиди от двата пола. Хипофизните гонадотропини и hCG действат идентично върху репродуктивния апарат на мъжките жаби, причинявайки освобождаването на сперматозоиди в клоаката. Този принцип се основава на Реакция на Гали-Майнини . Установяването на реакция е много евтино, защото жабите не изискват никакви специални грижи. Те се държат в хладно, полутъмно помещение в купа с малко количество вода, която трябва да стои под лек ъгъл, така че част от дъното да не е покрита с вода. Водата трябва да се сменя ежедневно. При такива условия жабите могат да живеят дълго без храна. Няколко часа преди експеримента жабите трябва да бъдат доведени до стаята, където ще се проведе реакцията, така че да се адаптират към стайната температура.

От жабите, обитаващи Съветския съюз, езерните жаби (Rana ridibunda) са най-чувствителни към CG, след това зелените (Bufo viridis) и обикновените жаби (Bufo bufo), най-малко чувствителни към CG са жабите от езерце (Rana esculenta). Най-често за инсцениране на реакция се използват блатни жаби, които реагират на CG цяла година. За експеримента се вземат полово зрели мъже с тегло от 50 до 75 g и дължина 6-7,5 см. Мъжките се различават от женските по това, че имат голяма царевица на първия пръст на предните си лапи.

Реакцията се поставя върху 2 жаби. Съдържанието на клоаката се изследва предварително за наличие на сперма. За това от клоаката се взема капка течност с очна пипета, нанася се върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп. Ако се открият сперматозоиди, жабата се изключва от експеримента.

Прясна сутрешна урина в количество 3-5 мл се инжектира в лимфната торбичка, разположена под кожата на гърба. След 2 часа резултатът се записва. Ако реакцията е положителна, сперматозоидите се намират в клоаката. Те се гледат под микроскоп при ниско увеличение в леко засенчено зрително поле. Реакцията се счита за положителна, ако има много сперматозоиди и повечето от тях са подвижни. Ако броят на сперматозоидите е малък (2-5), реакцията трябва да се повтори.

Жабите могат да се използват повторно за реакцията, но ако животното реагира положително 5-6 пъти, чувствителността му към CG постепенно намалява. В случай на положителна реакция, тази жаба може да се използва в следващия експеримент не по-рано от една седмица; ако резултатът е отрицателен - след 2-3 дни.

Реакцията върху мъжки жаби се сравнява благоприятно с други биологични проби по скоростта и простотата на техниката, може да се извърши във всяка обстановка и е достъпна за всеки практикуващ.

Реакцията на Galli-Mainini се използва широко не само за диагностика на нормална бременност. Използва се, ако има съмнение за кистозен дрейф или хорионепителиом. При кистозен дрейф реакцията е изразена и настъпва много бързо - след 15–20 минути. В такива случаи е необходимо да се определи количествено hCG. При нормална бременност се определя положителна реакция, когато жабата се инжектира с цяла урина или ако урината се разрежда не повече от 2-5 пъти. При кистозен дрейф реакцията остава положителна, когато урината се разрежда 10, 20 пъти или повече. При хорионепителиом се отделя огромно количество hCG и реакцията може да бъде положителна дори при разреждане на урината 100 пъти.

Когато се организира реакцията върху мъжки жаби, беше необходимо също да се определи количествено CG. Най-малкото количество урина, което причинява отделянето на сперматозоиди в клоаката при блатна жаба с тегло 45–50 g, 2 часа след инжектирането, се нарича жабешка единица (л. Е.). За да се определи количеството hCG в 1 литър изследвана урина, е удобно да се използва скалата, предложена от А. А. Давиденко (Таблица 1).

При хорионепителиома хроничният хепатит често придобива ново качество: той става термолабилен от термолабилен. Следователно реакцията се провежда след кипене на урина в продължение на 15 минути. Според IP Gomenyuk (1971), макар да се поддържа положителна биологична реакция към хроничен хепатит дълго време след отстраняване на кистозния дрейф, решаващият фактор при диагностицирането на хорионепителиома е не толкова увеличаването на титъра на гонадотропина, колкото прехода на отрицателна реакция в положителна или трансформация на термолабилен гонадотропин в термостабилен.

Говорейки за факта, че по време на физиологична бременност, hCG е термолабилен и само при патологични условия се превръща в термостабилен, те означават непоносимост към високи температури. Тестът за устойчивост на CG към ниски температури е извършен от I. I. Usoskin. Урината на бременни жени е била подложена на замразяване и съхранение при температура от 12 ° C за различни периоди от време (от 5 седмици до 2 месеца). Освен това във всички случаи беше разкрита термичната стабилност на CG.

Напредъкът в имунологията направи възможно разработването на нов метод за диагностициране на бременност, основан на факта, че hCG, като вещество от протеиново естество, има изразени антигенни свойства. Тези свойства са описани от Б. Цондек, но поради липсата на пречистени HCG препарати, силно чувствителни серологични реакции, недостатъчно разработени методи за имунизация на животни, те не могат да бъдат доказани.

Понастоящем, благодарение на подобряването на тези техники и наличието на пречистени препарати за CG, е установено, че при парентерално приложение на CG, изолирано от урината на бременни жени при животни, в кръвта се появяват специфични антитела. Получени са имунни серуми с висок титър на специфични антитела, съдържащи аглутиниращи, утаяващи и свързващи комплемента антитела. В съответствие със специфичните свойства на антителата за определяне на CG се предлагат следните реакции:

инхибиране на хемаглутинацията;
валежи;
обвързващо допълнение;
забавено утаяване на латексни частици.

Най-широко разпространената реакция на инхибиране на аглутинацията, предложена през 1960 г. от Wide и Gemzell. Той се основава на факта, че HCG, съдържащ се в урината на бременни жени, инхибира реакцията на аглутинация на еритроцитите, на чиято повърхност HCG се адсорбира от съответния антисерум. За да се получат антисеруми срещу CG, зайците се имунизират с един от препаратите за CG (хориогонин от Gedeon Richter, домашен HG, гонабион - GDR и др.). Антигенът е специално обработени овчи еритроцити, „заредени“ с едно от тези лекарства.

Реакция на инхибиране на хемаглутинацията е както следва: заешки антисерум, съдържащ антитела срещу hCG аглутинати, специално обработени овчи еритроцити, на повърхността на които се абсорбира hCG. Ако такъв антисерум първо се инкубира с урина, съдържаща този хормон, или с разтвор на гонадотропин и след това към него се добавят сенсибилизирани овчи еритроцити, тогава реакцията на аглутинация не възниква поради изчерпване на антителата в антисерума и еритроцитите се утаяват в форма на прозрачен пръстен в дъното на тръбата или кладенец на специална матрица, която се използва за формулиране на тази реакция. Липсата на аглутинация при тези условия показва наличието на hCG в изследваната урина, тоест диагнозата бременност се потвърждава. Реакцията отнема 1-2 часа.

За да се увеличат имунореактивните свойства на животинския организъм и антигенните свойства на препарата, съдържащ CG, се използват адюванти. Най-ефективен е адювантът на Freund (ланолин 20 ml, течен парафин 40 ml, убити туберкулозни бактерии 30 mg).

С. М. Мартинов и Б. П. Стернюк (1965) предлагат опростен метод за определяне на hCG в урината с помощта на реакцията на хемаглутинация.

Чашата се поставя в навлажнена чаша на Петри при стайна температура. Реакцията се записва под микроскоп. При наличие на hCG в урината липсва аглутинация на еритроцитите и обратно, ако не се съдържа, настъпва аглутинация.

Гравимунтест

Gravimuntest е широко използван. Набор от необходими за реакцията съставки се произвежда в СССР и Германската демократична република под името "Gravimuntest".

Както всеки имунологичен метод, тестът за гравимун се основава на инхибиране на реакцията на аглутинация между "заредени" HCG еритроцити, антисерум и урина на бременна жена.

При наличието на значително количество HCG в изследваната урина, хормонът се свързва с антисерума и еритроцитите се утаяват на дъното на епруветката под формата на пръстен или бутон. Ако урината, която трябва да се изследва, съдържа малко количество CG или последното изобщо липсва, еритроцитите не се утаяват, а се разпределят равномерно в разтвора. Точността на теста за гравимун е доста висока: чувствителността на реакцията се проявява в присъствието на около 2500 IU hCG в 1 литър урина. Това количество хормон обикновено присъства в урината на 8-10-ия ден от пропуснатите менструации.

Ампулата с гравимун съдържа лиофилизиран антисерум и "заредени" HCG еритроцити. В кутията с комплекта "Gravimune" има 5 запечатани ампули, което ви позволява едновременно да извършите 5 изследвания. Към всяка ампула е прикрепен капиляр, който се използва за събиране на необходимото количество урина за изследване. В допълнение към 5 ампули има бутилка с разтвор на натриев хлорид фосфатен буфер.

Отчет за реакция:

Ампулата се отваря с файл и към съдържанието се добавят 0,4 ml буфер.
Веднага добавете 2 капки задължително свежа сутрешна филтрирана урина към същата ампула с капиляр.
Съдържанието на ампулата се смесва и след това се оставя в кутията за 2 часа при стайна температура.
След 2 часа резултатът се записва. Ако еритроцитите са се уталожили на дъното на ампулата под формата на пръстен или бутон, т.е. не е настъпила аглутинация, резултатът от реакцията се оценява като положителен. Ако еритроцитите са дифузно разпределени, резултатът е отрицателен.

Реакцията остава положителна, докато хорионните въси остават в контакт с майчиния кръвен поток, което се случва при непълни аборти и нарушена извънматочна бременност.

Трябва да се помни, че всички реакции за определяне на hCG с цел ранна диагностика на бременността допълват клиничните наблюдения. Следователно трябва да се имат предвид клинични и лабораторни данни. Понякога се получават фалшиво положителни резултати: с увеличаване на количеството гонадотропини в климактеричния период, тумори на хипофизата, хормонална терапия.