Наръчник на химика 21

Химия и химическа технология

Общоприето е, че спектрофотометрията в инфрачервената област на спектъра е най-добрият метод за идентификация поради уникалността на ясно изразената област на пръстовия отпечатък на спектъра за дадено лекарство. [c.12]

За разделяне на пуринови и пиримидинови основи, нуклеозиди и нуклеотиди в лабораторната практика се използват всички видове хроматография, хроматография на хартия (включително електрофореза върху хартия и пръстови отпечатъци), тънкослойна хроматография [16], всички видове колонна хроматография (адсорбция, разпределение, йонообмен и проникване на гел) ... Смята се, че когато се разделя чрез тънкослойна хроматография, оптималното количество нуклеотиди е 0,2-30 µg чрез хроматография върху хартия 10-200 mgq чрез електрофореза върху хартия 100-500 µg. На колона нуклеотидите могат да бъдат разделени в количества от 50 μg до няколкостотин милиграма. Разбира се, в някои случаи на аналитично или подготвително разделяне тази рамка може да бъде значително разширена. [в.37]

Пептидна карта (пръстов отпечатък). Двуизмерно подреждане на пептиди, характерни за даден протеин, които се образуват при неговата частична хидролиза. [c.1016]

Голям интерес представлява тънкослойната модификация [40] на хартиен пръстов отпечатък съгласно Ingram, която дава възможност да се намали времето за получаване на пептидни карти (отпечатъци от пръсти) с коефициент десет или повече и значително да се намали количеството на анализираното триптичен хидролизат. Също така, за да постигнете това [c.317]

По-бърз метод за отделяне на пептиди от ензимен хидролизат е методът на пептидната карта (пръстов отпечатък или пръстов отпечатък), който комбинира електрофореза под високо напрежение и хартиена хроматография. Използвайки този метод, е възможно да се сравнят пептидни смеси, получени по време на разцепването на различни протеини, и да се разкрият такива малки разлики в аминокиселинния състав на отделни пептиди, като заместването на една аминокиселина с друга. Такива различия са от голямо значение при сравнителното изследване на хомоложни протеини от различни растителни и животински видове, както и при определяне на генетични промени в структурата на протеина в резултат на точкови мутации. [в.81]

Трябва обаче да се отбележи, че фракциите, елуирани от Sephadex, като правило не са хомогенни и съдържат няколко пептида (до 10 или повече). Следователно този метод на разделяне трябва да се комбинира с техники за фракциониране като пръстови отпечатъци и йонообменна хроматография. [c.83]

Подобни отпечатъци от олигонуклеотидни смеси могат да бъдат получени в тънък целулозен слой. Описани са два вида такива разделения: тънкослойна електрофореза от до- [c.55]

По-голямата част от скорошната работа е извършена с радиоактивна РНК, което е позволило да се установи структурата върху много по-малки количества материя. Заедно с методите за пръстови отпечатъци за бързо идентифициране и изясняване на структурата на олигонуклеотидите, този подход изглежда най-обещаващ за бъдещи изследвания в тази област. [в.78]

Отделни петна се елуират и в случаите, когато не се изисква допълнително пречистване, се идентифицират олигонуклеотидите и моларната концентрация се определя от тяхната радиоактивност спрямо общата радиоактивност. Типични пръстови отпечатъци, получени за РНК на сателитния вирус на тютюневия некрозен вирус чрез хидролиза с панкреатични IT-РНКази, са показани на фиг. 11.1 и 11.2. Съвпадението на снимките, получени в различни лаборатории, потвърждава, че за идентифициране на мономери, димери и тримери е достатъчно да се знае тяхното положение върху пръстовия отпечатък. [c.265]

Молекулното тегло и изоелектричната точка са характерни параметри на протеина. Точната идентификация на протеинова молекула обаче се основава на определянето на аминокиселинната последователност. Още на първия етап от този процес, който включва разделянето на протеин на малки фрагменти, може да се получи значителна информация за даден протеин. В момента се предлагат на пазара протеолитични ензими и химически реагенти, които разграждат протеините при специфични аминокиселинни остатъци (Таблици 4-10). По този начин ензимът трипсин разцепва остатъците от лизин и аргинин от страната на карбоксилните групи; химичният реагент цианоген бромид разцепва пептидните връзки, разположени след остатъците на метионин. Тъй като такива специфични ензими и реагенти разцепват ограничен брой връзки в протеинова молекула, при тяхното действие се образува смес от големи пептиди. Чрез разделяне на тази смес чрез електрофореза или хроматография е възможно да се получи пептидна карта, характеризираща изследвания протеин. Тези пептидни карти понякога се наричат протеинови пръстови отпечатъци (Фигура 4-53). [c.219]

В тази класическа техника за анализ на последователността има три стъпки. Първоначално РНК се разцепват на фрагменти с умерена дължина (около 50 двойки основи) чрез частична хидролиза с RNase. След това се анализира общият основен състав на тези дискретни фрагменти, последван от разделянето им на малки блокове, за които основната последователност може да бъде директно установена. И накрая, по-големите фрагменти се подреждат в желания ред, като се използва частично припокриване на последователността. Тези частични припокривания са резултат от различни методи на разцепване, получени от панкреатична RNase (специфична за пиримидини) и tacadiastase T] (специфична за гуанозин). Сложното разделяне на голям брой фрагменти, получени в резултат на частично смилане с нуклеази, се постига най-добре с помощта на двумерно разделяне (пръстов отпечатък), съчетаващо йонофореза върху целулозен ацетат при рН 3,5 в една посока и йонофореза върху DEAE целулозна хартия при киселинни стойности на рН [тридесет ]. Във всички случаи фрагменти се откриват без унищожаване с помощта на белязани с Р нуклеотиди. [c.193]

След като се установи първичната структура на протеин, обикновено не е необходимо да се провежда цялостно изследване на аминокиселинната последователност на хомоложни протеини от близки (съответстващи) източници. Бърз отговор може да се получи с помощта на техниката на пръстови отпечатъци с трипсин. За целта белтък с известна структура се подлага на хидролиза с трипсин и паралелно с това хомоложен протеин, получените в резултат на хидролиза пептиди обикновено се разделят чрез двумерна електрофореза или хроматография. Ако разликата в последователността е малка, тогава повечето пептиди трябва да заемат еднакво положение на двуизмерен пръстов отпечатък. Малкото пептиди, които се различават по подвижност, трябва да бъдат елуирани и подложени на аминокиселинния анализ на Edman. Тази техника е особено полезна при изследване на анормални хемоглобини, които се различават от нормалните по природа само на една област. [c.276]

В гореспоменатия диапазон на пръстови отпечатъци има ленти, съответстващи на различни вибрации на огъване. В този диапазон има не само абсорбционни ленти, характерни за изследваното съединение като цяло, но също така и ленти, типични за някои групи. По този начин картината на разпределението на абсорбционните ленти в диапазона 1000-750 cm T помага да се изясни позицията на заместителите при двойната връзка или в ароматния пръстен. [c.45]

Проведени са обширни систематични изследвания на състава на флавоноидите във висшите растения от различни видове и сортове. Двумерната хроматография върху хартия се използва за получаване на пръстови отпечатъци, които бързо определят състава на флавоноидите в определен растителен вид. Доказано е, че съставът на флавоноидите е изключително важна таксономична черта както при установяване на връзките между видовете, принадлежащи към едно и също семейство, така и при идентифициране на разликите между тясно свързани видове. В тази връзка наличието на флавоноиди от определени класове и разпределението на заместителите в отделните съединения може да бъде много характерно. [c.137]

Повечето от лентите на абсорбция в IR спектрите на органични съединения, като правило, не могат да бъдат дешифрирани от табличните данни за характерните честоти. Това се отнася главно до областта под 1400 см ", която е особено богата на върхове и върхове, което често се нарича" регион за пръстови отпечатъци "или" пръстови отпечатъци ". В този регион различните съединения се характеризират с подобни абсорбционни ленти в диапазона 3600-1400 см ", почти винаги имат различни честоти на вибрации. Също така е трудно точно да се отчетат различните обертонови и композитни честоти, които могат да се появят на различни места. [c.264]

На колона със смола Dowex 50X2 беше възможно да се разделят всички пептиди, определени чрез пръстов отпечатък съгласно Ingram, на отделни пикове. Тази колона се оказа много селективна, разделяйки изомерните пептиди val-tre-lei и tre-va.p-lei, ala-gly и gly-ala, gly-gly и deep-gly. [c.172]

В повечето случаи фрагментите, изолирани по метода STHNi, се оказват хомогенни сегменти на оригиналната молекула, съдържащи един или повече остатъци от специфични олигонуклеотиди. Олигонуклеотидният състав на всеки фрагмент се определя в резултат на пълна хидролиза с Т1 или панкреатични РНКази и последващо електрофоретично фракциониране на продуктите на хидролизата. За да се идентифицират образуваните олигонуклеотиди, полученият пръстов отпечатък се сравнява с пръстовия отпечатък на цялата 5S РНК. В съмнителни случаи идентификацията на олигонуклеотида се потвърждава чрез алкална хидролиза. [c.91]

Възможностите за приложението му са ограничени от увеличаването на броя на различните олигонуклеотиди и усложняването на пръстовите отпечатъци.Добре известно е в много лаборатории, участващи в анализа на нуклеотиевите последователности, че трудностите се увеличават не в аритметичната прогресия, а по-скоро в геометричната. [c.97]

Sander, 1970) може да осигури основата за бърз и ефективен метод за изясняване на структурата на по-дългите олигонуклеотиди. Първо се установява структурата на най-краткия продукт на хидролиза (виж фиг. 7.8 и 7.9). Следващият олигомер съдържа първата последователност и допълнителен сегмент до втория Gp, който може да бъде идентифициран на пръстов отпечатък след изчерпателна хидролиза на T-RNAase на продуктите, съответстващи на втория пик. По същия начин от данните за третия пик може да се получи следващият участък от веригата и т.н. [c.147]

Отпечатъците, получени след хидролиза на мРНК на хемоглобин с различни нуклеази, трябва да се различават от пръстовите отпечатъци, получени от известна проба от рРНК от ретикулоцити. [c.255]

Ingram получи първите пептидни карти (пръстови отпечатъци - пръстови отпечатъци), показващи, че разликите [c.218]

Вижте страниците, където се споменава терминът ДНК пръстови отпечатъци: [c.526] [c.39] [c.53] [c.59] [c.318] [c.39] [c.53] [c.318] [c.56] [c.88] [c.159] [c.173] [c.217] [c.256] [c.264] [c.267] [c.268] [c.275] [c.277] [c.283] [c.159] Изкуствени генетични системи Vol.1 (2004) - [c.238]