Бактериалният щам Bacillus subtilis, притежаващ свойството на антибиотична резистентност, използван за получаване на лекарството "бактиспорин"

Употреба: биотехнологии, пробиотик, устойчив на антибиотици щам на Bacillus subtilis 3H, производство на терапевтични и профилактични лекарства, дисбиоза, ензимен дефицит на храносмилателната система, гнойни инфекции, хранителни алергии. Същност на изобретението: получен щам устойчив на антибиотици Bacillus subtilis GISK N 248. Размери на клетките 1,5-4,0 микрона на 0,4-0,6 микрона, клетките са грам-положителни, капсулите не се образуват, образуват спори, видът на дишането е аеробен. Расте в различни хранителни среди. Разгражда глюкозата, захарозата, манитола, малтозата. Хидролизира нишестето, казеина, уреята, пептонизира млякото, втечнява желатина. Не разгражда тирозин. Не образува хемолизин и фибринолизин. Намалява нитратите до нитрити. Използва цитрат. Образува амоняк и сероводород, не образува индол. Потиска растежа на стафилококи, протеи, клебсиели, ешерихия коли, гъбички дрожди, стрептококи и Pseudomonas aeruginosa. Щамът е устойчив на полимиксин, рифампицин, нечувствителен към пеницилин, линкомицин, стрептомицин. Щамът може да се използва като производствен щам за получаване на лекарство от групата на пробиотиците, което може да се използва заедно с антибиотици. 3 раздел.

Изобретението се отнася до областта на биотехнологиите, по-специално до производството на терапевтични и профилактични лекарства, използвани при разстройства на стомашно-чревния тракт, дисбактериоза, ензимен дефицит на храносмилателната система, гнойни инфекции, хранителни алергии.

Известен щам Bacillus subtilis 534, използван за получаване на лекарството "Sporobacterin", което е предназначено за профилактика и лечение на заболявания на стомашно-чревния тракт, дисбактериоза.

Известният щам обаче е чувствителен към антибиотици, с изключение на полимиксина. Това свойство на щама ограничава обхвата на лекарството при тежки форми на гнойно-възпалителни заболявания, лечението на които изисква съвместно приложение на бактериално лекарство и антибиотик.

Целта на изобретението е да създаде нов устойчив на антибиотици щам за получаване на лекарство за горната цел.

Техническият резултат, получен от използването на новия щам, се изразява в повишаване на ефективността на лечението поради възможността за комбинирано използване на бактериален препарат с антибиотици. Щамът Bacillus subtilis 3H е депозиран в колекцията на S. L.A. Tarasevich под № 248. Щамът Bacillus subtilis 3H е получен в резултат на многократна субкултура на щама Bacillus subtilis 534 чрез хранителен агар с нарастваща концентрация на антибиотика.

Щамът Bacillus subtilis 3H се характеризира със следните свойства.

Пръчки. Размерът на клетките на еднодневна агарова култура (1,5-4,0) х (0,4-0,6) микрона, често са разположени във вериги. Клетките оцветяват положително за грам, не образуват капсули, образуват вътрешни централни спори.

Колонии върху месо-пептонов агар по-често, грапави с фестонирани ръбове от бели до сиви и бледо розови нюанси, по-рядко гладки с равномерни ръбове.

Върху месо-пептонов бульон при 37 o С след 18-24 часа се образува филм на повърхността и дънна утайка.

Аеробни, оптимални условия на растеж при 37 o С и рН 6.0-7.5.

Разгражда глюкозата, захарозата, манитола, малтозата. Дава положителна реакция на Voges-Proskauer към ацетоин. Хидролизира нишестето, казеина, уреята, пептонизира млякото, втечнява желатина. Не разгражда тирозин. Произвежда каталаза, лецитиназа. Не образува хемолизин и фибринолизин. Намалява нитратите до нитрити. Използва цитрат. Образува амоняк и сероводород, не образува индол.

Потиска растежа на стафилококи, протеи, клебсиели, ешерихия коли, гъбички дрожди, стрептококи и Pseudomonas aeruginosa.

Щамът е устойчив на полимиксин, рифампицин, нечувствителен към пеницилин, линкомицин, стрептомицин.

Сравнителни данни за антибиотична чувствителност и антагонистична активност на Bacillus subtilis 3H и известни щамове са представени в таблица. 1 и 2 (съответно).

Данни от таблицата 1 показват, че новият щам има висока антибиотична резистентност. 2, антагонистичната активност на щама Bacillus subtilis 3H става по-висока в сравнение с оригиналния щам Bacillus subtilis 534.

Използването на щама е илюстрирано със следните примери.

Пример 1. За отглеждане на щама Bacillus subtilis 3H се използва синтетична среда, съдържаща пептон, малтоза, минерални соли и микроелементи.

Щамът Bacillus subtilis 3H се инокулира върху матраци с агар синтетична хранителна среда, съдържаща пептон, малтоза, минерални соли, микроелементи и се поставя в термостат при 37 o C за 18-20 часа. Състав в обем от 5 литра и се отглежда за 3 -4 часа, докато културата достигне фазата на експоненциален растеж. Тази култура се използва като инокулум за инокулиране на реактора Bior с капацитет 100 литра. Култивирането се извършва в продължение на 16-20 часа преди прехода на културата в споровата форма. Получената бактериална маса се концентрира до (100-120) 10 9 клетки/ml, измива се от хранителната среда със стерилен 0,9% разтвор на натриев хлорид. Разпределете в ампули (1.00.1) ml всяка и изсушете. Полученият препарат е наречен "Бактиспорин", представлява смес от живи вегетативни клетки и спори.

Лекарството "Bactisporin" е безвредно, не съдържа чужда микрофлора. Остатъчната влага не надвишава 3,5% Има специфична активност: броят на клетките в една доза от лекарството (1-5) 10 9 клетки/ml, антагонистична активност (зона на забавяне на растежа на тестваните щамове микроорганизми) е 25-40 mm.

По този начин щамът, който получихме, може да се използва като производствен щам за получаване на лекарство от пробиотичната група, което може да се използва заедно с антибиотици.

Бактериалният щам Bacillus subtilis GISK N 248, който носи свойството на антибиотична резистентност, използван за получаване на лекарството "Bactisporin".