ТЕХНИКА НА ЗАСИВАНЕ, МЕТОДИ ЗА ИЗОЛИРАНЕ НА ЧИСТИ КУЛТУРИ И КУЛТУРНИ СВОЙСТВА НА МИКРООРГАНИЗМИТЕ. ОПРЕДЕЛЯНЕ НА КОЛИЧЕСТВОТО НА БАКТЕРИИТЕ

Цел на урока. Овладейте техниката на засяване на микроорганизми върху твърди и течни хранителни среди и методи за изолиранеи бактериални култури. Да запознае студентите с основните културни характеристики на микроорганизмите и методите за определяне броя на бактериите.

Оборудване и материали. Култури от бульон и агар B. cereus, E. coli и S. aureus в епруветки и в чашки на Петри, смесенибульонна култура Е. coli и S. aureus, стерилни MPA и MPB в епруветки, чаши на Петри, физиологичен разтвор на MPA (8% натриев хлорид) в чаши на Петри, стъклени шпатули, стерилни пиПастьорски бримки, бактериологични бримки.

Културата на микроорганизмите е популация (пило) лепилоток върху хранителна среда. Засяване и презасяване на култури от микроорганизмиизследвания върху хранителни среди е най-честата методологична техника, използвана за първично изолиране на микроорганизъм от който и да е обект, както и да поддържа култури в жизнеспособно състояние в лабораторни условия.

Чистата култура е популация от бактерии от един вид или биологичен вариант (биовар), отглеждани на хранителна среда.

Щамове - чисти култури от микроорганизми от един и същи вид, изолирани от различни обекти или от един и същ обект, но по различно време.

Колония - макроскопски видим клъстер от микрофонни клеткироорганизъм на повърхността или вътре в гъста хранителна среда, образувана в резултат на възпроизводството на един животспособна клетка. Поради тази причина обикновено се разглежда колониятакато чиста култура на микроорганизми.

Техника на засяване на микроорганизми. Култури от роден матРиалът често се извършва с пастьорска пипета от микрокултуриорганизми - бактериологична верига в зоната на стерилния въздух над пламъка на горелката. На съдове за култура (околоетикети, чаши на Петри, колби и др.) напишете номера на изследване, под който е регистриран материалът, датата на сеитба.

Сеитба върху течна хранителна среда. Епруветката с тестовия материал и епруветката с хранителната среда се държат в лявата ръка, в дясната ръка се взема бактериологичен контур или пипетачаши от епруветки (фиг. 37). Над пламъка на горелкаръбовете на епруветките са изкормени, бактериологичният контур (пипета) се въвежда в епруветката с материала, материалът се прехвърля в епруветката ссъс силна хранителна среда и се изтръсква от контура в средата, без да се намокря държачът на цикъла. Краищата на тръбите отново саогън над пламъка на горелката, затворете тръбите със запушалки, стеОсвобождаване на цикъла и поставяне в статив. Използваната пипета се спуска до края в буркан с дезинфектант.

Сеитба върху твърда хранителна среда. Изпълнявайте по различни начини.

Когато се инокулира в епруветка: 1) епруветки с инокулиран микрофонлабораторна култура и хранителна среда (MPA) се взема в лявата ръка, епруветката с MPA се държи със скосената повърхност на средата нагоре. Стерилизирана бактерия се инжектира в епруветка с микробна култура (или друг материал), отворен близо до пламък.логически цикъл, леко докосване на цикъла до повърхността наdy (материал), вземете материала, прехвърлете го в епруветка с aздравословна хранителна среда. Цикълът се спуска до дъното на епруветката, потапя се в кондензна течност и се извършва в зигзагообразно движение отдолу нагоре по повърхността на средата (засяване с "удар") (фиг. 38). Тръбите са затворени със запушалки, контурът е изгорен. Инокулираните епруветки се поставят в термостат; 2) в насеитба с убождане в колона от среда, епруветка с плътна (не скосена) среда се взема в лявата ръка, корк се отстранява от епруветката над пламъка на горелката, вертикала се пробива с примка с материалано в центъра на епруветката хранителната среда, контурът се отстранява, изгаря, тръбата с инокулираната среда се затваря със запушалка (фиг. 39).

При инокулиране върху чаша на Петри: чинията се взема в лявата ръка, капакът се повдига леко с палеца на лявата ръка,изгорете краищата на чашата в зоната на слота върху пламъка на горелката, добаветезасяване на материал върху повърхността на хранителната среда, след това расиразтрийте го със стъклена шпатула или бактериолозиконтур (фиг. 40).

Сеитба върху полутечна хранителна среда. Извършва се чрез инжектиране в колона с хранителна среда.

Изолиране на чисти култури от микроорганизми. С бактериолоПри химично изследване желаният микроорганизъм се намира в материала, като правило, в смес с бактерии от други видове. Възможно е да се идентифицират чрез класически методи на бактериологияхранят микроорганизма само ако е под формата на чиста култура.

Методи, базирани на механична клетъчна дисоциация. Тези методи се използват най-често за изолиране на чисти култури.обиколка на микроорганизми.

Метод на Пастьор (метод на разреждане): серия от последователни, често десетократни разреждания се приготвят от тестовия материал в стерилна течна хранителна среда в епруветкаkakh или колби (10 -1 ... 10 -10). Предполага се, че броят на микрофонаПри всяко следващо разреждане ще има по-малко роботизирани клетки, отколкото в предишното, а в някои от епруветките ще остане само една микробна клетка, която ще даде/стартира чиста култура на Микроорганизма. За успешното прилагане на този метод обачеда, необходимо е желаният микроорганизъм в материаланадделя над придружаващите видове.

Метод на Кох (метод на изливане): малко количество от изпитвания материал се вкарва в епруветка с разтопен и овтвърдява се до 45,50 "C MPA, разбърква се, след това капка пиХранителната среда се прехвърля във втора епруветка с разтопен МРА и др. Броят на разрежданията зависи от прогнозния брой микроорганизми в тествания материал. След това съдържанието на всяка епруветка се излива в стерилни чаши на Петри, след като средата се втвърди, културите се поставят в термостат. Микробни клетки, фиксирани в плътна среда по време на размножаванеобразуване на колонии, от които е възможно да се премахнат (yt) чиста култура на микроорганизма.

Метод на Drygalsky: вземете три до пет чаши на Петри с твърда хранителна среда. Семенният материал се вкарва в една от чашите и се разстила с шпатула по повърхността на яматативна среда. Без да изгаря шпатулата, оставена върху нея от майкатаал последователно се втрива върху повърхността на средата във втория, третия и останалите съдове. В последните чаши на Петри, след инкубация в термостат, обикновено се наблюдава образуването на изолирани колонии от бактерии.

Следващият метод за получаване на изолирани колонии е по-икономичен. Бактериологичнипривидна примка със семената майкаалено прави няколко пътипаралелни щрихи в един сектор на петриева чиния с ямкатвърд агар (фиг. 41). Примките се изгарят в пламъкаки, остави майката да се охладиала от първия сектор

Техники на биологична основалогически характеристики на микроорганизмите.Насочен към подаванезабавяне на растежа на придружаващата микрофлора.

Подгряване: при изолиране на чиста култура от спорообразуващи бактериални видове, тестовият материал се загрява при 80 ° С в продължение на 20 минути или се вари за кратко. Вегетативните клетки на придружаващата ги микрофлора при тези условия умират, а спорите на желания микроорганизъм остават жизнеспособни и покълват след засяване върху хранителни среди.

Използване на селективно подаващо устройствомедии, които съдържат вещества, които инхибират растежа на съпътстваща микрофлора (антибиотици, оцветители и др.) - честа употреба при изследване на замърсен материалла. Трябва обаче да се има предвид, че селективните фактори насто не са в бактерициден, а в бактериостатичен концентрове, така че клетките на придружаващите микроорганизми не растат, но остават жизнеспособни на повърхността на яматасреда и когато присаждането на колонии от тестовата култура върху обикновена среда може да предизвика смесена култура.

Биоанализът - инфекция на чувствителни лабораторни животни - е метод, при който не само патогенът се изолира от патологичния материал, но също така се изследва вирулентността на чиста култура. Тялото на животно с негозащитни фактори служи като биологичен "филтър", койтоry унищожава придружаващата непатогенна микрофлора, но не е в състояние да потисне размножаването на вирулентни бактерии, което улеснява изолирането на патогена в чиста култура от тъканите на животно, умряло или умъртвено за диагностични цели.

Когато изолирате чисти култури от някои видове бактерии, използвайтеизползват другите им биологични характеристики. Например, споспособността на микроорганизма да расте при ниско (листерия) или високоkih (термофилни бактерии) температури, които са извън температурните граници на свързаните видове резервоаритерий. За изолиране на културата на P. vulgaris се използва способността на този вид да дава пълзящ растеж (роене) на повърхността на салашумна хранителна среда. За тази цел материалът, съдържащ P. vulgaris, се инокулира в кондензна вода на дъното на тръба със скосен MPA, без да докосва повърхността на средата. Придружаващата микрофлора расте в долната част на хранителната среда, а протеусът под формата на прозрачен филм се разпространява нагоре.

За да се изолира C. tetani, материалът се инокулира по посока на сал.културна среда в чаши на Петри и след отглеждането културата се отстранява от периферията на пълзящ растеж.

Културни свойства на микроорганизмите. В процеса на идентифициранемикроорганизми, заедно с други свойства,вижте културни черти - особености на растежа върху твърди, течни и полутечни хранителни среди с определениловия.

На плътен средите изучават колонии от микроорганизми. Бактеръжта от всеки вид образуват колонии с определениками, които обикновено се вземат предвид при идентифициране. Времемерки на колонии: големи - с диаметър 4,6 mm и повече, средниnie - 2. 4 mm, малки - 1,2 mm и точни колонии с диаметър по-малък от 1 mm. Формата на колониите може да бъде правилният кръглой, неправилен (амеба, розетка), заостренной (фиг. 42). Цветът зависи от способността на микроорганизма да образува пигмент: бял, жълт, червен, синьо-зелен и др. Бактериите, които не синтезират пигмент, образуват цвятнови колонии. Вземете предвид естеството на повърхността, коятоТорая може да бъде груба, лъскава, матова, суха, влажна, гладка, радиално или концентрично набраздена. Краищата на колонията могат да бъдат гладки, вълнообразни, назъбениmi, ресни, те се изследват с невъоръжено око и под микроскоп с ниско увеличение (фиг. 43). Релеф (околоfil) се определя чрез изследване на колонията отстрани; разграничават плоски, конични, куполни, плоски с конусвиден център или депресия в центъра на колонията, с удебеленъгли (ролкови) ръбове (фиг. 44). Помислете запрозрачност на колонията: непрозрачна, полупрозрачна, пропрозрачен. Структурата може да бъде еднородна, зърнеста, влакнеста и т.н. (фиг. 45). Открива се със слабо увеличениемикроскоп. Консистенцията може да бъде пастообразнаной, лигавица, плътна (суха) и др .; то се определя отнараства до колонията с бактериологична верига. Колонии на някоивидовете ръж растат в дебелината на хранителната среда, което също се определя с помощта на бактериологична верига. Мирис: много видове бактерии в процеса на отглеждане на хранителни среди отделят специфичен аромат.

Ценна допълнителна информация за характеристиките наколонии нения дава изследването си в наклонен лъч светлина (фиг. 46). Култури върху прозрачна агарова среда в чинии за домашни любимциRi се поставя на сцената на бинокулярна лупа. Между бинокулярната лупа и източника на светлина поставете огледало от микроскопа с вдлъбната страна нагоре, така че отразените от него лъчи да попаднат в равнината на изследвания обект под ъгъл 40,45 °. Огледалото е настроено на равен уд