Определяне на хемоглобина в урината

Ако има голямо количество кръв в урината, те говорят за макрогематурия, малка примес от кръв - микрогематурия, се определя чрез микроскопско изследване - еритроцитите се намират в утайката - или с помощта на химични методи.

Хемоглобинът се открива с помощта на реакции:

  • с гваякова киселина;
  • с амидопирин;
  • с бензидин;
  • за експресен анализ се използват реактивни таблетки или тест ленти, произведени от различни компании.

Принцип на метода: хемоглобинът в кисела среда катализира реакцията на взаимодействие на водороден пероксид с някои съединения (гуаякова киселина, амидопирин, бензидин), в резултат на което се получават цветни съединения: с гуанова киселина - синьо, с амидопирин - виолетово, с бензидин - синьо.

Приготвяне на проби от урина: 1) изследвайте прясно събраната и добре разклатена урина в абсолютно чист контейнер: в стояща урина хемоглобинът се превръща в метхемоглобин, който няма способността да пренася кислород, което може да доведе до фалшиво отрицателни резултати; 2) концентрирайте хемоглобина и освободете урината от някои сродни вещества (миоглобин, хром, мед, йодид и калиев бромид), които дават подобен резултат на реакцията, за това изсипете 8-10 ml нефилтрирана урина в епруветка, добавете 2 мл ледена оцетна киселина и 4- 5 мл диетилов етер; съдържанието на епруветката се разклаща и се оставя в решетка за няколко минути, за да се отдели етилацетатният екстракт, в който преминава хемоглобинът; горният слой (екстракт от оцетен етер) се използва за провеждане на реакции.

Тест с гуаякова киселина

Реактиви: 1) Прясно приготвен наситен разтвор на гваякова киселина: в епруветка се добавя щипка гваякова киселина, добавят се 2–4 ml 96% етанол и се разтваря до оцветяване на силния чай; в реакцията се използва разтвор без утайка; 2) 3% разтвор на водороден прекис: добавете 27 части дестилирана вода към 3 части пресен перхидрол; разтворът се приготвя непосредствено преди употреба.

Напредък в определянето. Добавете 2-3 ml от етилацетатния екстракт към епруветката, добавете 8-10 капки разтвор на гваяк киселина и 8-10 капки разтвор на водороден прекис.

Оценка на резултатите. Наличието на хемоглобин в урината води до синьо оцветяване на пробите. При ниско съдържание на хемоглобин, оцветяването може да се появи няколко минути след началото на реакцията.

Тест с амидопирин

Реактиви. 1) 5% разтвор на амидопирин: 0,5 g амидопирин се поставя в градуиран цилиндър и се добавя 96% етилов алкохол до обем от 10 ml; 2) 3% разтвор на водороден прекис: добавете 27 части дестилирана вода към 3 части пресен перхидрол; разтворът се приготвя непосредствено преди употреба.

Напредък в определянето. В епруветка добавете 2-3 ml етилацетатен екстракт, добавете 8-10 капки 5% алкохолен разтвор на амидопирин и 8-10 капки 3% разтвор на водороден прекис.

Оценка на резултата. Ако в урината има хемоглобин, се развива лилаво оцветяване.

Бензидинов тест

Реактиви: 1) 0,5% разтвор на бензидин (C12H12N2) в 50% разтвор на оцетна киселина (CH3COOH). Срок на годност в продължение на няколко дни, когато се съхранява в контейнер от тъмно стъкло (изисква ежедневно наблюдение); 2) 3% разтвор на водороден прекис (H2O2).

Напредък в определянето. В епруветката се добавят 5-6 капки разтвор на бензидин, добавят се същото количество 3% разтвор на водороден прекис и 3-4 капки урина.

Оценка на резултата. Ако в урината има хемоглобин, сместа в епруветката става зелена или синя.

Забележка. По-концентриран разтвор на бензидин може да даде положителна реакция дори с броя на червените кръвни клетки, който се намира в нормалната урина.

Модификация на реакционната настройка.

  1. 1 стъкло бензидин се нанася върху стъклен предмет, след това 2 капки ледена оцетна киселина, 1 капка урина и 2 капки 3% разтвор на водороден прекис.
  2. Смес от разтвор на бензидин и водороден прекис в равни части (няколко капки) се нанася върху безпепелен филтър, през който предварително е филтрирано определено количество урина (10-20 ml) и се наблюдава развитието на цвета.
  3. Водородният пероксид може да бъде заменен с бариев пероксид (BaO2), за който 0,25 g основен бензидин и 0,1 g бариев пероксид се разтварят в 5 ml 50% разтвор на оцетна киселина. Реактивът се приготвя непосредствено преди употреба.

Отрицателният резултат не изключва наличието на кръв в урината, тъй като хемоглобинът бързо се превръща в метхемоглобин, който няма каталитични свойства.